Окраска основным фуксином по Пфейферу
Окраска основным фуксином по Пфейферу

Окраска основным фуксином по Пфейферу

Метиленовый синий – и краситель, и антисептик

Среди множества химических реактивов особое место занимают вещества с антисептическим (обеззараживающим) действием, способным предупреждать процессы разложения на поврежденных слизистых и кожных покровах. К таким веществам можно отнести бриллиантовый зеленый, йод кристаллический, этиловый спирт, перекись водорода купить которые можно без рецепта в любой аптеке, и также, как и для салициловой кислоты цена вполне доступна. К этому же списку относится и метиленовый синий. Несмотря на огромный выбор современных лекарственных препаратов с антибактериальным действием все же в медицинской практике более востребованными остаются препараты, хорошо известные еще нашим бабушкам. Это связано не только с их доступной ценой, но, прежде всего, эффективным действием, проверенным временем.

Определение

Метиленовый синий (метилен, метиловая синь или метиленовый голубой) – антисептик в виде кристаллов темно-зеленого цвета с бронзовым отливом. Он не растворим в хлороформе и диэтиловом эфире, слабо – в воде и этаноле.

Впервые метилен был получен методом синтеза известным немецким ученым Гернихом Каро в 1876 году.

Где применяется

Метиловая синь широко применяется в таких сферах:
— текстильной промышленности – краситель хлопка, шелка и шерсти в синий или ярко-голубой цвет. Однако, следует отметить, что такая окраска светочувствительна (слабоустойчива к свету), поэтому она подвержена к выцветанию;
— аналитической химии – компонент для определения кальция, магния, олова, кобальта, ртути, кадмия и других;
— аквариумистике – антисептик во время инкубирования икры;
— ветеринарии;
— легкой промышленности — пигмент при производстве цветных карандашей.

Метилен в медицине

Благодаря уникальному физико-химическому составу, способному образовывать плохо растворимые соединения с белками бактерий, что приводит к гибели микроорганизмов, метиленовый синий относится к лекарственным препаратам и входит в группу противомикробных средств. Современная фармакологическая промышленность, используя не только новые методы производства, но и специальное лабораторное оборудование, приборы, лабораторную посуду из стекла, выпускает водные и спиртовые растворы метилена.

Препарат используется в:

— хирургии и дерматологии (обработка ожогов, гнойных и инфицированных ран, экзем, фурункулов и др.). В данных целях применяется только спиртовой 1-3 % раствор;
— стоматологии (стоматиты, гингивиты);
— урологии (промывание или наружное применение 0,02 % водного раствора при заболеваниях мочеполовой системы – цистита, уретрита);
— ЛОР (ангина, фарингит и др.).

Метиленовый голубой, как и активированный уголь, применяется при острых отравлениях угарным газом, нитритами, сероводородом, синильной кислотой. Данный химический реактив ослабляет действие токсинов на организм.

Помимо противомикробного действия метилен, обладая окислительно-восстановительными свойствами, снабжает организм ионами водорода.

Побочные действия

Не стоит забывать, что метиленовая синь способна снижать содержание гемоглобина в крови, что может привести к развитию анемии. С особой осторожностью следует принимать препарат людям с заболеваниями желудочно-кишечного тракта и мочеполовой системы. Основные признаки при побочных действиях – рвота, тошнота, снижение аппетита, головная боль, психологический дискомфорт, боль в области желудка, грудной клетки; при аллергических реакциях – зуд, покраснение на коже, крапивница (мелкая сыпь).

Меры предосторожности

Метиленовый синий обладает сильными красящими свойствами, поэтому данный фактор нужно учесть при выборе лабораторной посуды или материала для тары. Посуда должна быть только из лабораторного стекла, так как изделия из пластика или полиэтилена подвергаются окрашиванию. Как и с бриллиантовым зеленым, во избежание покраски рук нужно пользоваться перчатками смотровыми.

Качественное оснащение от химреактивов до лабораторного оборудования и приборов

Как для проведения обычного анализа, так и для сложного химико-биологического исследования необходимо не только качественное химсырье, но и сопутствующее лабораторного оснащение. Магазин химических реактивов Москва розница и оптовая продажа компании «ПраймКемикалсГрупп» – это именно тот надежный партнер, который оснастит Вашу лабораторию от тигля кварцевого и фильтровальной бумаги до весов аналитических и весов электронных лабораторных самых последних моделей. Весь представленный товар отвечает стандартам ГОСТ и прошел контроль качества на заводе-изготовителе.

C Prime Chemicals Group выгодно сотрудничать: мы предлагаем широкий ассортимент качественной продукции, низкие цены, возможную доставку по Москве и Московской области.

Источник

Краска для мазков синь

Смешивают 30 мл насыщенного спиртового раствора метиленового синего со 100 мл 0,01 % раствора гидроксида калия. Мазки окрашивают в течение 3 — 5 мин, ополаскивают в проточной воде, дифференцируют 3 сек в 0,5 % растворе уксусной кислоты и ополаскивают в проточной воде. Проводят через спирты, просветляют в ксилоле и заключают в бальзам. Препараты можно изучать при масляной иммерсии без заключения в бальзам, но в этом случае они хранятся недолго.

Результат: бактерии окрашиваются в густо-синий цвет.

Окраска основным фуксином по Пфейферу

Вместо метиленового синего можно воспользоваться карбол-фуксином либо как таковым, либо в разведенном виде (1:10). Окрашивание длится от 15—30 секунд до 2—3 минут, в зависимости от степени разведения перекрашивания допускают дифференцировку 70° спиртом (10—20—30 секунд).

Окраска основным фуксином по Пфейферу. 1 г основного фуксина растворяют в 10—15 мл этилового спирта и смешивают со 100 мл 5 % раствора фенола. Затем 3 капли полученного раствора добавляют к 10 мл дистиллированной, воды и этой смесью окрашивают мазки в течение 30 — 40 мин. После этого ополаскивают водой, дифференцируют 0,1 % раствором соляной кислоты в абсолютном спирте, ополаскивают в абсолютном спирте и заключают в бальзам.

Результат: бактерии окрашиваются в малиново-красный цвет.

Окраска генциановым или метиловым фиолетовым

Для ориентировочной окраски бактерий можно воспользоваться также карболовым генциановым фиолетовым или кристаллическим фиолетовым. Однако эти красители при дифференцировке 70 0 спиртом легче извлекаются из клеточных элементов и бактерий, чем фуксин, поэтому, пользуясь ими, рекомендуется сильно перекрашивать.

Смешивают 10 мл насыщенного спиртового раствора генцианового фиолетового (генцианвиолет) со 100 мл 2,5 % раствора фенола (смесь хранится долго). Мазки окрашивают в течение 2 — 5 мин через фильтровальную бумагу, промывают в проточной воде, сушат и исследуют при масляной иммерсии.

Результат: бактерии окрашиваются в густо-фиолетовый цвет.

Окраска карболовым тионином Николя

Смешивают 1 часть насыщенного спиртового раствора тионина с 10 частями 1 % водного раствора фенола, мазки окрашивают 3 — 5 мин, ополаскивают в проточной воде, дифференцируют 30 секунд в 96 % спирте, снова ополаскивают в воде и высушивают. Препарат изучают при масляной иммерсии.

Результат: бактерии окрашиваются в темно-синий цвет.

Окраска по Граму

Красящие растворы.

Раствор кристаллического фиолетового по Эрлиху: 1,2 г кристаллического фиолетового растворяют в 12 мл 96 % спирта и добавляют 100 мл свежеприготовленной анилиновой воды, полученной при смешивании 2 мл анилина со 100 мл воды. Эта красящая смесь может храниться 2 нед. Вместо кристаллического фиолетового можно использовать метиловый фиолетовый.

Читайте также:  Палитру краски шварцкопф брилианс палитра
Красящие смеси для грамположительных бактерий:

1) 10 г кристаллического фиолетового + 100 мл спирта;

2) 10 г генцианового фиолетового +100 мл спирта;

3) 10 г метилового фиолетового + 100 мл спирта;

4) 1 мл насыщенного спиртового раствора кристаллического фиолетового + 10 мл дистиллированной воды;

5) 0,25 мл насыщенного спиртового раствора кристаллического фиолетового +100 мл 5 % раствора уксусной кислоты;

6) 8 — 9 г метиленового синего +100 мл спирта;

7) 30 мл насыщенного раствора метиленового синего в спирте + 1 г гидроксида калия + 99 мл дистиллированной воды.

Красящие смеси для грамотрицательных бактерий:

1) 8 — 9 г основного фуксина + 100 мл 96 % спирта;

2) 1 мл насыщенного спиртового раствора основного фуксина + 10 мл дистиллированной воды;

3) 1 г основного фуксина +1 г фенола + 0,5 мл глицерина + 10 мл 96 % спирта +100 мл дистиллированной воды;

4) 0,2 — 0,5 % водный раствор сафранина либо 0,25 % раствор сафранина в 10 % спирте.

Методика окраски.

1. Мазки крови, цереброспинальной жидкости, экссудатов фиксируют над пламенем горелки (быстро проводят 3 раза над пламенем, так чтобы мазок прогревался до 70-80 0 С в течение 3-4 с), затем высушивают. Кроме фиксации над огнем, для мазков применима фиксация в метиловом спирте (5 мин) или в парах формалина (в сосуде Коплина) в течение 15 мин.

2. Наливают на фиксированный мазок карболовый или анилиновый генциановый фиолетовый (или кристаллический фиолетовый) на 2—3 минуты. Во избежании осадков окрашивают через фильтровальную бумагу. Очень удобно работать с полосками фильтровальной бумаги, предварительно пропитанной 1% спиртовым раствором одного из вышеуказанных красителей и затем высушенной. Такую окрашенную и высушенную бумагу накладывают на мазок и смачивают дистиллированной водой. Продолжительность окрашивания остается прежней (2—3 мин.).

3. Сливают краску, аккуратно удаляют фильтровальную бумагу и быстро споласкивают в водопроводной воде (15—30 секунд).

4. Мазок заливают на 1-2 мин раствором Люголя иди другим йодистым раствором, например по Граму (2 г йодида калия растворяют в 2-3 мл дистиллированной воды, добавляют 1 г кристаллического йода, доливают до 300 мл, а по Вейгерту до 100 мл дистиллированной воды).

5. Раствор сливают, мазок промывают водой (водопроводной или дистилированной).

6. Дифференцируют 96° спиртом, наливая и сливая его, пока отходит синяя краска и не обесцветится мазок (приблизительно 20-40-60 секунд). Во время дифференцировки препарат все время покачивают.

Если вместо спирта использовать ацетон, то промывание продолжается 30 с. Можно дифференцировать смесью спирта и ацетона (1:1) 30 с.

7. Промывают стекла в проточной или дистиллированной воде 1 — 2 мин.

8. Дополнительно окрашивают (для выявления грамотрицательной группы бактерий) либо 0,5% водным раствором нейтрального красного (нейтральрот), либо разведенным (в 10 раз) карболфуксином Циля — 1-2-3 минуты. Возможна докраска сафранином (0,2-0,5 % водный раствор или 0,25 % раствор в 10 % спирте) основным коричневым (бисмаркбраун) либо пиронином J или В (2-5 мин).

9. Промывают в проточной воде 5 с и высушивают фильтровальной бумагой.

Результат: Грамположительные бактерии окрашиваются в иссиня-черный (темно-синий) цвет, грамотрицательные — в красный или коричневый в зависимости от красителя; ядра клеток — ярко-красные, цитоплазма — розовая.

Следует заметить, что в классической прописи при окраске по Граму обычно не промывают мазки в воде ни после окраски генциановым фиолетовым (кристаллическим фиолетовым), ни после обработки раствором Люголя, ограничиваются лишь сливанием растворов. Предлагаемое промывание в воде имеет целью только чистоту в работе, тем более, что оно ни в какой мере не отражается на результатах окрашивания.

Окраска по Романовскому-Гимзе

Приготовление красителя

Готовый жидкий краситель перед окрашиванием мазков разводят из расчета 1-2 капли красителя на 1 мл дистиллированной воды. Мазки окрашивают 20 — 25 минут при 37 0 C во влажной камере (закрытая чашка Петри с увлажнённым фильтром на дне). После окрашивания мазки промывают в проточной воде, сушат на воздухе и исследуют при масляной иммерсии.

Красящую смесь Романовского-Гимзы в виде порошка (коммерческий краситель) растворяют в смеси равных объемов метилового спирта и глицерина (800 мг красителя на 100 мл растворителя). Краситель растворяется плохо, поэтому лучше его растереть с растворителем в количестве 300 мг на 100 мл, а затем, помешивая, добавлять краситель до получения нужной концентрации. Приготовление красителя часто занимает несколько дней. Важно в качестве растворителей использовать химически чистый метиловый спирт и глицерин, так как примеси ухудшают свойства красителя. Вместо метилового спирта можно применять 100 % этиловый спирт. Приготовленную красящую смесь хранят в сухом прохладном месте в плотно закрытом сосуде.

Методика окраски

1. Мазки, фиксированные в метиловом спирте, окрашивают раствором (1 мл готовой жидкой краски + 2 мл основного буферного раствора + 47 мл дистиллированной воды) в течение 40—120 мин (продолжительность окрашивания подбирают эмпирически). Пользуются фосфатным буфером, но рН буфера зависит от вида мазка: для мазка костного мозга — 5,8 — 6,0, для мазка крови — 6,4 — 6,5, для выявления простейших — 6,8, малярийного плазмодия — 7,0 — 7,2.

2. Ополаскивают в дистиллированной воде, высушивают и исследуют при иммерсии.

Результат: бактерии окрашиваются в фиолетово-красный цвет, цитоплазма клеток — в голубой, ядра — в красный.

Дифференцированная окраска кислотоустойчивых бактерий (микобактерии туберкулеза и лепры)

Кислотоустойчивыми называют бактерии, которые после окрашивания фуксином не обесцвечиваются под действием концентрированных минеральных кислот и спиртов. Особенностью этой группы бактерий является их невосприимчивость к красителям, поэтому для их окрашивания применяют подогретые концентрированные красители. Наиболее распространен метод Циля-Нильсена.

Окраска микобактерий туберкулеза карбол-фуксином по Цилю-Нильсену

Приготовление красителя

Для приготовления раствора карболового фуксина 1 г основного фуксина растворяют в 2 мл глицерина и доливают до 100 мл 5 % раствором фенола. Р. Лилли (1969) рекомендует следующую пропись: в 50 мл спирта растворить 25 г фенола, а затем 5 г основного фуксина и долить дистиллированной водой до 500 мл.

Методика окраски

1. Наливают на фиксированный мазок карбол-фуксин Циля (окрашивают через фильтровальную бумагу) и подогревают над пламенем спиртовки до появления паров. Эту температуру поддерживают в течение 1—2 минуты, не доводя до кипения.

Читайте также:  Краски Polycolor в Москве 361 товар

2. Сливают краску, удаляют фильтровальную бумагу и основательно промывают в водопроводной воде.

3. Дифференцируют 1% солянокислым спиртом (на 70° спирте) до тех пор, пока мазок не примет бледно-розовый или бледно-фиолетовый тон (примерно 30—60 секунд).

4. Промывают в воде 15-30 и более секунд.

5. Докрашивают метиленовым синим Лефлера 15-30 секунд.

6. Основательно споласкивают в воде и высушивают фильтровальной бумагой.

Мазки, перекрашенные метиленовым синим, можно дифференцировать 70° спиртом.

Такое простое окрашивание мазков на микобактерии туберкулеза практически имеет наибольшее значение. Наряду с ним, но значительно реже, применяются и другие способы: метод обогащения, посевы, прививки животным.

Результат: микобактерии окрашиваются в красный цвет на общем голубом или синем фоне.

Источник



Краска для мазков синь

Приготовление насыщенных спиртовых растворов красок. В основе приготовления многих красящих растворов лежит предварительное получение насыщенных спиртовых растворов красок, которые готовят следующим образом. Порошки красок в определенном для каждого красителя количестве (указанном ниже) всыпают во флаконы, заливают 96% этиловым спиртом и ставят в термостат при температуре 37 °С на 18-24 ч.

Периодически содержимое флаконов взбалтывают. В течение указанного времени значительная часть краски растворяется и на дне флакона остается лишь небольшой осадок.

Насыщенные растворы красок могут храниться долгое время во флаконах темного стекла со стеклянными притертыми или резиновыми пробками.

Приготовление рабочих спирто-водных растворов красок. В небольшое количество насыщенного спиртового раствора краски добавляют дистиллированную воду в разных соотношениях.

Рецепт 7. Метиленовый синий, насыщенный спиртовой раствор:
Метиленовый синий — 8,0-9,0 г
Этиловый спирт 96% (С2Н5ОН) — 100 мл

Рецепт 8. Метиленовый синий, спирто-водный раствор:

Пропись 1:
Метиленовый синий, насыщенный спиртовой раствор — 1 мл Вода дистиллированная — 30 мл

Пропись 2:
Метиленовый синий — 1 мл
Этиловый спирт 96 % — 10 мл
Вода дистиллированная — 100 мл

Рецепт 9. Метиленовый синий, водный раствор:
Метиленовый синий — 1,0 г
Вода дистиллированная — 1000 мл

Применяется для ориентировочной окраски препаратов, для окраски толстой капли крови. При окраске препаратов по Цилю-Нильсену кислотоустойчивых бактерий дает отчетливо окрашенные клетки, выявляет некислотоустойчивые формы бактерий на общем нежно-голубом фоне.

Рецепт 10. Метиленовый синий, щелочные растворы Леффлера. Щелочные растворы метиленового синего устойчивы и могут храниться во флаконах со стеклянной или резиновой пробкой длительное время, не изменяя своих свойств. Напротив, во время хранения свойства краски даже улучшаются, поэтому она может быть заготовлена на несколько лет.

Пропись 1:
Метиленовый синий, насыщенный 8% раствор — 30 мл
Вода дистиллированная — 100 мл
Калия гидроксид (КОН) 10% раствор — 2 капли

Пропись 2:
Метиленовый синий — 3,0 мл
Этиловый спирт 96 % — 2,0 мл
Калия гидроксид (КОН) 1 % раствор — 1 мл
Вода дистиллированная — 100 мл

Перемешать в указанном порядке перечисленные ингредиенты. Краска должна пройти период созревания, который длится несколько месяцев. Процесс созревания может быть ускорен путем аэрации раствора. Для этого посуду заполняют краской не более чем наполовину, вместо пробки используют рыхлый ватный тампон. Содержимое флакона следует часто перемешивать.

Источник

Метиленовый синий и другие красители в микроскопии

Для изучения микроорганизмов производят микроскопирование как живых, так и убитых микробов в неокрашенном и окрашенном виде.

Микроскопический препарат готовят на предметном стекле. Предметные стекла должны быть кристально чисты и абсолютно обезжирены. На поверхности обезжиренного стекла вода легко расплывается и не образует капель шаровидной формы.

Дочерние и родовые шрамы на поверхности дрожжевых клеток.

Новые стекла перед употреблением кипятят в 1%-ном растворе соды 10 минут, промывают водой, слабой соляной кислотой и хорошо прополаскивают в дистиллированной воде.

Стекла после исследования надо обработать раствором серной кислоты в течение 2 часов, хорошо промыть в воде и прокипятить 10 минут в 4%-ном растворе соды. Ополоснутые затем дистиллированной водой стекла протирают чистой полотняной тканью.

Хранить предметные стекла лучше всего в банке с притертой пробкой, погруженными в смесь спирта с эфиром, взятых в равных объемах. Из банки предметные стекла достают пинцетом.

Покровные стекла — тонкие стеклышки (толщиной 0,15-0,17 мм) размерами обычно 18х18 мм, 20х20 мм, 18х24 мм. Ими накрывают препарат на предметном стекле для изучения.

Как приготовить раствор метиленового синего

Физиологический раствор натрия хлорида с метиленовым синим: метиленовый синий 0,1 г; физиологический раствор натрия хлорида -100,0 мл. Отвешивают указанное выше количество метиленового синего и помещают его в чистую бутылку. Прибавляют физиологический раствор натрия хлорида и тщательно перемешивают до полного растворения кристаллов краски. Для работы фильтруют небольшое количество раствора краски в капельницу.

Техника приготовления краски из сухого порошка. Некоторое количество порошка малахитового зеленого или метиленового синего растирают пестиком в чистой сухой ступке. Отвешивают 3 г порошка краски, насыпают его в бутылку и прибавляют дистиллированную воду, чтобы получилось 100 мл раствора. Для приготовления рабочего раствора наливают 1 мл одного из полученных выше 3%-х водных растворов краски в бутылочку емкостью 250 мл. Прибавляют 100 мл глицерина и 100 мл дистиллированной воды; перед использованием раствор тщательно перемешивают.

Где взять метиленовый синий?

Коврик, скальпель, метиленовый синий.

Если у вас домашний микроскоп, возникает вопрос, где брать препараты?

Всё очень просто: этот препарат продаётся в магазинах, он используется в аквариумистике. Смотрите на фото. Также для приготовления препаратов для микроскопа пригодится скальпель и коврик для резки (безопасный, вы не будете царапать под ним стол, он самовосстанавливающийся).

На фото — коврик для резки, скальпель и бутылочка метиленового синего. Всё приобретено в самом обычном (не специализированном) интернет-магазине.

Метиленовый синий — это ещё и кондиционер для аквариумной воды, стоит он буквально копейки.

Метиленовый синий для аквариумной воды, описание.

Безопасный коврик для резки удобен для работы со скальпелем.

Исследование микроорганизмов в живом виде

Плесневые грибы и дрожжи лучше рассматривать в живом виде в препарате «раздавленная капля». Клетки этих микроорганизмов относительно крупные, обычно при микроскопировании в живом виде хорошо выявляются их форма, размеры, детали внутреннего строения, характер размножения (почкование, деление, спорообразование и т.д.).

Бактерии чаще рассматривают в мертвом виде на фиксированных окрашенных препаратах (из-за их малого размера). При этом мы получаем более ясное представление о форме и размерах клеток, о способности их к спорообразованию.

Читайте также:  Отзывы о краске keune semi color

В живом виде в «раздавленной капле» бактерии рассматривают в том случае, когда выясняют их способность к движению.

При микроскопировании дрожжей в каплю жидкости на стекле добавляют петлей небольшое количество метиленовой сини (до голубого окрашивания) и эту смесь тщательно размешивают. Окраска живых дрожжей метиленовой синью применяется для того, чтобы выявить мертвые клетки, легко окрашивающиеся в синий цвет. Живые клетки остаются неокрашенными, так как не пропускают краску через свою оболочку.

Приготовленный на предметном стекле препарат дрожжей накрывают покровным стеклом и рассматривают с объективом 40Х. В таком препарате обычно хорошо видны прозрачные овальные или круглые клетки дрожжей с ядрами и оболочками, которые хорошо заметны в клетках живых дрожжей. Мертвые клетки, как правило, более мелкие по сравнению с живыми и окрашены в синий цвет.

Окраска дрожжей метиленовым синим

Наибольшее распространение получил метод выявления мертвых клеток с помощью метиленового синего. После попадания в клеточную цитоплазму под действием ферментов редуктаз этот краситель восстанавливается живыми дрожжевыми клетками до бесцветных соединений. Мертвые клетки окрашиваются в синий цвет. Эффективность данного метода зависит не только от состояния клеточной мембраны, но и от активности оксидоредуктаз в клетке.

Окраска клеток метиленовым синим и сафранином

Более полную информацию о физиологическом состоянии дрожжей дает окрашивание фиксированных препаратов метиленовым синим, танином и сафранином. Сафранин применяется для выявления клеточных ядер, которые окрашиваются в красный цвет. Если клетки живые и содержат оксидоредуктазы, расщепляющие метиленовый синий, то окрашенный препарат приобретает красноватый, а не фиолетовой оттенок.

Реактивы: краситель метиленовый синий; краситель сафранин; 5 %-й раствор танина в воде; физиологический раствор (0,9 %-й раствор NaCl).

Нанести каплю суспензии дрожжей на обезжиренное мылом предметное стекло. Оставить высыхать на воздухе при комнатной температуре. После высыхания капли зафиксировать препарат (10 раз провести стеклом в пламени спиртовки). Нагревать несильно, не пережигать. Залить стекло раствором метиленового синего и выдержать в течение 4 минут при комнатной температуре. Смыть краситель теплой водой. Залить стекло свежеприготовленным раствором танина на 2 минуты. Смыть краситель под струей воды. Залить на 16 минут стекло раствором сафронина. Смыть краситель. Микроскопирование следует проводить нефлюоресцирующим маслом при увеличении 400х.

Препарат живых бактерий

Морфология голодных и старых клеток (фотоувеличение 400х).

Препарат живых бактерий готовится подобно препарату дрожжей, но бактерии можно рассматривать и без добавления краски. Препарат рассматривается с иммерсионным объективом 90 X, лучше всего в затемненном поле (т.е. с прикрытой диафрагмой). Если культура бактерий подвижная, то хорошо видны быстрые разнохарактерные движения отдельных клеток.

Для приготовления препарата плесневых грибов очень осторожно (чтобы не разрушить органов спороношения) специальной иглой (можно препаровальной) или ботаническим пинцетом снимают кусочек пленки гриба и переносят его в каплю воды, предварительно нанесенную на предметное стекло. Препарат осторожно, слегка придавливая, накрывают покровным стеклом и рассматривают под микроскопом с объективом 8Х. При этом увеличении хорошо различается строение органов спороношения плесневых грибов. Для подробного изучения отдельных деталей строения (гиф, сумок и т.д.) препарат рассматривают с объективом 40X.

При приготовлении препаратов в раздавленной капле нужно помнить :

1. При опускании покровного стекла на каплю следует прикоснуться его ребром к краю капли и, постепенно наклоняя, опустить стекло.

2. Капля не должна быть большой, чтобы жидкость не переливалась за края и не попадала на верхнюю сторону покровного стекла. Избыток воды снимите фильтровальной бумагой.

3. Одиночные пузырьки воздуха, оставшиеся под покровным стеклом, обычно не мешают наблюдению. Но если их много, препарат лучше приготовить заново.

4. Препарат не должен быть слишком густым, чтобы микроорганизмы не заслоняли друг друга.

5. Приготовленные препараты рассматривают тут же после приготовления (особенно живых бактерий), так как в иначе вода высыхает и клетки бактерий теряют подвижность.

6. Бактериологическую петлю (или иглу) перед каждым очередным пассажем и после него (нанесение капли воды на стекло, снятие культуры с агара и ее размешивание, взятие краски и т.д.) следует обязательно докрасна прокаливать в пламени горелки. После прокаливания петлю быстро охлаждают на воздухе (держат 2-3 секунды, ни к чему не прикасаясь) и приступают к выполнению очередного этапа работы.

Морфологическая модель клетки.

Простая окраска препаратов

При простой окраске препаратов на фиксированный мазок наливают несколько капель какого-либо красящего раствора (метиленового синего, разведенного фуксина и прочее). Для получения более чистых препаратов рекомендуется красящий раствор наливать на отрезок фильтровальной бумаги, которой покрывают мазок.

Раствор краски в среднем выдерживают на мазке 2-3 минуты (в зависимости от вида краски):

  • Фуксин красит интенсивно, причем окрашиваются одинаково хорошо все виды бактерий. Продолжительность окрашивания раствором фуксина вполне достаточна на протяжении 1-2 минут.
  • Щелочную метиленовую синь оставляют для окрашивания мазка на 2-3 минуты. Она красит менее сильно, но препарат получается более изящный, к тому же различные бактерии приобретают окраску различной интенсивности. При окраске метиленовой синью у крупных клеток (например, дрожжевых) дифференцируется ядро и цитоплазма.
  • Раствор генцианвиолета держат для окраски 3-5 минуты.

Виды красителей для приготовления образцов для микроскопа

Окраска клеток дрожжей иодонитротетразолиум хлоридом.

Красители в микробиологии являются солями двух типов: 1) кислые красители – у которых ион, придающий окраску (хромофор), является анионом (пример — эозин); 2) основные красители – те, у которых роль хромофора играет катион (пример — метиленовый синий).

Кислые красители являются кислыми потому, что хромофор, будучи кислотой, при образовании придающей окраску соли, связывается с основанием (NaOH).

Красители второго типа называются основными потому, что хромофор, будучи основанием, при образовании соли связывается с кислотой (HCl).

Обычно кислые красители связываются более интенсивно с цитоплазменными (основными) компонентами клетки, а основные – с ядерными (кислыми).

Методы окрашивания основаны либо на микроскопировании в видимом (обычном) свете, либо на флуоресцентной микроскопии. Красителями для светового микроскопа являются метиленовый синий, раствор Люголяи др. Из флуоресцентных красителей применяют магниевую соль 1-анилино-8-нафтален сульфоновой кислоты (Mg-ANS), а также дигидрородамин.

Источник